Plásmido CRISPR de Activación (h) beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β₁-AR: sc-400660-ACT

ADRB1 codifica el receptor β1-adrenérgico humano (β1-AR), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gs para estimular la adenilil ciclasa, elevar el AMPc y activar la señalización dependiente de PKA. Esta vía regula la cronotropía y la inotropía cardíacas, modula el manejo del calcio e influye en respuestas transcripcionales a través de efectores aguas abajo como CREB. La señalización del β1-AR se entrecruza con mecanismos de desensibilización y tráfico de GPCR, incluidos la fosforilación mediada por GRK/β-arrestina, la internalización y la resensibilización del receptor. La expresión o señalización desregulada de ADRB1 está implicada en la fisiopatología cardiovascular y proporciona un punto de entrada mecanístico para estudiar redes de señalización sensibles al estrés y la farmacología de receptores en células humanas.

beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADRB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADRB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADRB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADRB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía beta 1 Adrenergic Receptor/ADRB1/β1-AR en células tumorales con expresión de ADRB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.