Plásmido Doble Nickase (h) BECN1/Beclin-1: sc-400139-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BECN1/Beclin-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BECN1/Beclin-1 (h) y el plásmido de doble nickasa BECN1/Beclin-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BECN1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BECN1/Beclin-1 Anticuerpo (E-8): sc-48341
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BECN1/Beclin-1 | sc-400139-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BECN1/Beclin-1 | sc-400139-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BECN1 (Beclin-1) es un regulador central del inicio de la autofagia y de la nucleación del autofagosoma gracias a su papel en el ensamblaje del complejo PI3K de clase III junto con PIK3C3/VPS34, ATG14 y UVRAG. Al coordinar la producción de fosfatidilinositol-3-fosfato en los fagóforos nacientes, Beclin-1 conecta la detección de nutrientes y las respuestas al estrés con las vías de degradación lisosomal, influyendo en la proteostasis, el control de calidad de orgánulos y la señalización inmunitaria innata. La actividad de BECN1 se modula mediante interacciones con proteínas de la familia BCL2 y eventos de fosforilación que integran señales de mTOR, AMPK y vías apoptóticas. La desregulación de la autofagia dependiente de BECN1 se ha asociado con la neurodegeneración, la biología de las infecciones y la adaptación celular relacionada con el cáncer, lo que la convierte en un nodo estudiado con frecuencia en redes de homeostasis y respuesta al estrés.
BECN1/Beclin-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BECN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BECN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BECN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BECN1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.