Plásmido CRISPR de Activación (h) BCNP1: sc-404731-ACT

FAM129C codifica BCNP1, una proteína intracelular implicada en la señalización y en programas transcripcionales que configuran el estado de las células inmunitarias y las respuestas adaptativas al estrés. La expresión de FAM129C está enriquecida en linajes hematopoyéticos y se ha relacionado con la modulación de la señalización inflamatoria y de vías activadas por receptores que influyen en la supervivencia y la diferenciación celular. Se ha descrito una expresión alterada de BCNP1 en diversas afecciones asociadas al sistema inmunitario y en múltiples contextos oncológicos, lo que respalda su utilidad como herramienta molecular para estudiar la plasticidad de linaje y las interacciones tumor–sistema inmunitario. Como resultado, FAM129C constituye un nodo útil para investigar la reprogramación de vías en inmunidad, proliferación y biología del estrés celular en sistemas modelo humanos.

BCNP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAM129C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCNP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAM129C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAM129C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCNP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAM129C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCNP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCNP1 en células tumorales con expresión de FAM129C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.