Plásmido CRISPR de Activación (h2) BCMO1: sc-405374-ACT-2

El BCO1 humano codifica la β-caroteno 15,15′-monooxigenasa 1 (BCMO1), una dioxigenasa citosólica dependiente de hierro no hemo que cataliza la escisión central del β-caroteno dietario para generar todo-trans-retinal, un precursor clave del ácido retinoico y de los cromóforos visuales. Al controlar la disponibilidad de retinoides, BCMO1 influye en la señalización de retinoides mediante programas transcripcionales dependientes de RAR/RXR que regulan la diferenciación epitelial, el metabolismo lipídico y las respuestas al estrés oxidativo. La variación genética o la alteración de la expresión de BCO1 se ha vinculado a diferencias interindividuales en la eficiencia de conversión de provitamina A y se ha asociado con rasgos que abarcan el estado de vitamina A, fenotipos metabólicos y la biología retiniana/ocular. Las herramientas de edición génica de BCO1/BCMO1 respaldan estudios mecanísticos del metabolismo de carotenoides, la homeostasis de retinoides y las redes transcripcionales posteriores en modelos celulares humanos pertinentes, incluidas investigaciones de interacciones dieta–gen y del diálogo entre vías con el manejo de lípidos y las defensas antioxidantes.

BCMO1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCO1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCMO1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCO1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCO1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCMO1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCO1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCMO1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCMO1 en células tumorales con expresión de BCO1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.