Plasmide CRISPR d'Activation (h) BCMA: sc-403058-ACT

TNFRSF17 code l’antigène de maturation des lymphocytes B (BCMA), un membre de la superfamille des récepteurs du TNF exprimé principalement sur les lymphocytes B à un stade tardif et sur les plasmocytes. BCMA agit comme récepteur d’APRIL (TNFSF13) et de BAFF (TNFSF13B), reliant la liaison du ligand à NF-κB et à des programmes de signalisation de survie associés, qui soutiennent la différenciation des plasmocytes, la production d’immunoglobulines et une immunité humorale durable. Une signalisation et une expression dérégulées de BCMA sont étroitement associées à une homéostasie anormale des plasmocytes et sont fréquemment étudiées dans le contexte du myélome multiple et d’autres hémopathies malignes de la lignée B. En tant que récepteur à expression restreinte à une lignée, BCMA est également utilisé comme outil moléculaire pour explorer la biologie des plasmocytes, la régulation immunitaire et les interactions tumeur–microenvironnement.

BCMA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFRSF17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BCMA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFRSF17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFRSF17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BCMA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFRSF17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BCMA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BCMA dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFRSF17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.