Partículas Lentivirales de Activación (h2) Bcl-x_S/L: sc-400170-LAC-2

El gen humano BCL2L1 codifica las isoformas Bcl-xS y Bcl-xL, reguladores de la familia BCL-2 generados por empalme alternativo que ajustan la permeabilización de la membrana externa mitocondrial y la activación de las caspasas al equilibrar las actividades antiapoptótica de Bcl-xL y proapoptótica de Bcl-xS. Las proteínas Bcl-x integran señales de supervivencia y de estrés a lo largo de la vía intrínseca de la apoptosis, conectándose con la señalización de p53, los programas de supervivencia mediados por MAPK/AKT, la homeostasis del calcio y la autofagia/mitofagia para modelar las decisiones sobre el destino celular y la dinámica mitocondrial. La expresión o el empalme desregulados de BCL2L1 se asocian con frecuencia a umbrales de apoptosis alterados en el cáncer, las afecciones inflamatorias y la neurodegeneración, donde los cambios en la proporción de isoformas pueden influir en la resistencia a la muerte celular y en la homeostasis tisular. La edición génica de BCL2L1 permite estudios mecanísticos de la función específica de cada isoforma, el control del empalme y las interacciones proteína–proteína con factores BH3-only, lo que respalda cribados de genómica funcional, el análisis de vías de señalización y el desarrollo de modelos celulares relevantes para enfermedades.

Las partículas de activación lentiviral Bcl-xS/L (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BCL2L1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Bcl-xS/L (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BCL2L1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Bcl-xS/L. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BCL2L1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.