Bcl-w Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402639

Visão geral

BCL2L2 codifica a Bcl-w, um membro antiapoptótico da família BCL-2 que preserva a integridade da membrana externa mitocondrial ao conter efetores pró-morte como BAX e BAK. Ao controlar a apoptose mitocondrial, a Bcl-w influencia decisões intrínsecas de morte celular em resposta à retirada de fatores de crescimento, a danos no DNA e ao estresse oxidativo, moldando a sobrevivência celular, a adaptação ao estresse e a homeostase tecidual. A atividade de BCL2L2 interage com vias que regulam a dinâmica mitocondrial e a sinalização de sobrevivência, incluindo entradas associadas a PI3K/AKT e MAPK que convergem para o equilíbrio da família BCL-2. A expressão desregulada de Bcl-w tem sido associada a limiares apoptóticos alterados e a fenótipos de sobrevivência relevantes para a oncogênese e para a resposta ao tratamento em múltiplos contextos tumorais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Bcl-w (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene BCL2L2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do BCL2L2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do BCL2L2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Bcl-w.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de BCL2L2 para a investigação da sinalização de Bcl-w, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) BCL2L2 críticos para a função Bcl-w
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos BCL2L2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Bcl-w Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Bcl-w Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus BCL2L2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Bcl-w Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Bcl-w (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia BCL2L2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo BCL2L2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.