Plásmido Doble Nickase (m2) Bcl-2: sc-419304-NIC-2

El gen Bcl2 de ratón codifica la proteína Bcl-2, un regulador de la apoptosis intrínseca localizado en las mitocondrias que preserva la integridad de la membrana externa mitocondrial y suprime la liberación de citocromo c y la activación de caspasas. Bcl-2 actúa dentro de la red de interacciones de la familia BCL-2 para equilibrar señales promotoras de supervivencia y proapoptóticas, configurando decisiones sobre el destino celular aguas abajo de las respuestas al estrés y de la retirada de factores de crecimiento, a la vez que se conecta con vías que controlan la homeostasis del calcio y la autofagia. La expresión desregulada de Bcl2 se asocia con una supervivencia alterada de poblaciones celulares inmunitarias y neuronales, y se ha implicado ampliamente en la transformación oncogénica y en la resistencia a los programas de muerte celular. La edición génica de Bcl2 en ratón facilita estudios mecanísticos de la apoptosis, el desarrollo y la selección de linfocitos, la señalización de puntos de control mitocondriales y el modelado genotipo–fenotipo en contextos relevantes para la enfermedad.

Bcl-2 El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Bcl2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Bcl2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Bcl2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Bcl2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.