Plásmido CRISPR de Activación (h) Bcl-11b: sc-403460-ACT

BCL11B codifica el factor de transcripción Bcl-11b, una proteína con dedos de zinc C2H2 que actúa como regulador definitorio de linaje en el desarrollo de las células T y la diferenciación de los timocitos. Integra señales de vías clave del desarrollo, incluidas Notch y los programas transcripcionales impulsados por el TCR, para controlar el estado de la cromatina y coordinar redes de expresión génica que gobiernan la proliferación, la supervivencia y el compromiso de linaje. La actividad desregulada de BCL11B se ha vinculado con cambios en la identidad de las células inmunitarias y con un control transcripcional aberrante en contextos de enfermedades hematológicas, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudiar los circuitos de regulación génica. En modelos celulares humanos, la perturbación de los niveles de Bcl-11b se utiliza comúnmente para investigar la diferenciación, la lógica de los potenciadores y la cooperación entre factores de transcripción.

Bcl-11b El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCL11B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bcl-11b El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCL11B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCL11B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bcl-11b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCL11B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bcl-11b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bcl-11b en células tumorales con expresión de BCL11B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.