Plásmido CRISPR de Activación (h) BCAR3: sc-404301-ACT

BCAR3 (resistencia al antiestrogénico 3 en cáncer de mama) codifica una proteína adaptadora que acopla la señalización de receptores e integrinas con la remodelación del citoesqueleto y la motilidad. BCAR3 interactúa con CAS/BCAR1 y otros componentes relacionados de las adhesiones focales para modular la actividad de quinasas de la familia Src, la señalización de pequeñas GTPasas y vías downstream que influyen en la adhesión, migración y proliferación celular. A través de estas conexiones de red, BCAR3 contribuye a la regulación de la dinámica epitelio‑mesénquima y de la señalización de crecimiento dependiente del contexto. La expresión o señalización alteradas de BCAR3 se han asociado con la invasión de células tumorales y con fenotipos de respuesta endocrina, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar programas oncogénicos impulsados por la adhesión.

BCAR3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCAR3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCAR3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCAR3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCAR3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCAR3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCAR3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCAR3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCAR3 en células tumorales con expresión de BCAR3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.