Plásmido CRISPR de Activación (m) BCAP: sc-429913-ACT

El gen murino **Pik3ap1** codifica **BCAP** (adaptador de células B para PI3K), un adaptador citoplasmático que conecta la señalización de los inmunorreceptores con la activación de la fosfoinosítido 3-quinasa. BCAP acopla señales ascendentes del receptor de células B y de receptores de la inmunidad innata a la señalización **PI3K–AKT**, moldeando programas transcripcionales aguas abajo que influyen en la activación de linfocitos, la supervivencia y la reprogramación metabólica. A través de estas funciones, **Pik3ap1** se utiliza para estudiar la integración de señales entre vías inmunitarias, incluido el crosstalk con respuestas dependientes de **NF-κB** y **MAPK**. La desregulación del cableado de la vía PI3K y de la propagación de señales mediada por adaptadores es relevante en modelos de disfunción inmunitaria e inflamación, lo que respalda la investigación mecanística en inmunología y señalización de sistemas.

BCAP El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pik3ap1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCAP El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pik3ap1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pik3ap1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCAP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pik3ap1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCAP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCAP en células tumorales con expresión de Pik3ap1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.