BBS2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404725-NIC

BBS2は、一次繊毛の形成および繊毛内外への膜受容体・シグナル伝達タンパク質の選択的輸送に必須な多タンパク質複合体「BBSome」の中核構成要素をコードしています。繊毛輸送における役割を通じて、BBS2はHedgehog経路をはじめ、細胞の恒常性維持や組織発生を調整する他の感覚シグナル伝達カスケードなど、繊毛依存的な主要経路に影響を及ぼします。BBS2機能の破綻はバルデー・ビードル症候群（Bardet–Biedl syndrome）および関連する繊毛病の表現型と結び付いており、繊毛機能不全の機序を研究するための広く用いられる標的となっています。ヒト細胞モデルでは、BBS2を撹乱することで、受容体局在、小胞輸送ダイナミクス、ならびに繊毛シグナルの変化に伴う下流の転写応答を解析できます。

BBS2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BBS2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BBS2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BBS2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BBS2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。