Plásmido Doble Nickase (h) Bax: sc-400042-NIC

BAX codifica Bax, un efector proapoptótico de la familia BCL-2 que regula la permeabilización de la membrana externa mitocondrial y compromete a las células con la apoptosis intrínseca. En respuesta al estrés celular y a señales de daño del ADN, Bax sufre una activación conformacional, se trasloca a las mitocondrias y oligomeriza para promover la liberación de citocromo c y la activación posterior de las caspasas. La actividad de Bax se integra con los puntos de control regulados por p53 y con redes de señalización de supervivencia, moldeando así las decisiones sobre el destino celular durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La desregulación de la señalización de BAX se asocia ampliamente con la biología del cáncer, la neurodegeneración y las respuestas al estrés genotóxico, lo que lo convierte en un nodo muy utilizado para estudiar la apoptosis y el control de la vía mitocondrial.

Bax El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BAX en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BAX. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BAX. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BAX alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.