Plasmide CRISPR d'Activation (h) Bak: sc-400646-ACT

Le gène humain **BAK1** code Bak, un effecteur pro-apoptotique de la famille **BCL-2** qui s’oligomérise dans la membrane externe de la mitochondrie afin de favoriser la libération du cytochrome c et l’activation des caspases au cours de l’apoptose intrinsèque. Bak intègre des signaux de stress tels que les dommages à l’ADN, le stress du réticulum endoplasmique (RE) et le retrait des facteurs de croissance via des protéines **BH3-only**, agissant de concert avec **BAX** pour exécuter la perméabilisation de la membrane externe mitochondriale. Une activité altérée de **BAK1** peut déplacer l’équilibre entre survie et mort cellulaire programmée, influençant la biologie tumorale, l’homéostasie immunitaire et les réponses aux lésions tissulaires. En tant que régulateur nodal de l’apoptose, Bak est largement étudié dans les voies qui gouvernent l’intégrité mitochondriale, la signalisation du stress cellulaire et la sensibilité aux stimuli pro-mort.

Bak Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BAK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Bak Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BAK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BAK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Bak. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BAK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Bak au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Bak dans les cellules tumorales présentant une expression de BAK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.