Plasmide CRISPR/Cas9 KO Bag-3 (h): sc-402929

Présentation

BAG3 code le co-chaperon Bag-3, un régulateur du contrôle qualité des protéines inductible par le stress, qui s’associe à HSP70 et aux petites protéines de choc thermique pour coordonner l’autophagie sélective assistée par chaperons et la protéostasie. Bag-3 influence l’apoptose et les voies de signalisation de survie cellulaire en modulant les interactions de la famille BCL2 et en reliant la dynamique du cytosquelette aux réponses au stress via des voies incluant la fonction autophagie–lysosome et le turnover dépendant de l’ubiquitine. Dans les cellules humaines, l’activité de BAG3 est impliquée dans le maintien de l’intégrité mitochondriale et sarcomérique, ainsi que dans la régulation des réponses au stress protéotoxique, mécanique et oxydatif. La dérégulation des réseaux associés à BAG3 a été reliée à la cardiomyopathie, à des mécanismes de maladies neurodégénératives et à l’adaptation au stress pertinente en oncologie, ce qui en fait un nœud utile pour étudier l’homéostasie et le remodelage en contexte de stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Bag-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BAG3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BAG3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BAG3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Bag-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BAG3 pour l'étude de la signalisation de Bag-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BAG3 essentiels à la fonction de Bag-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BAG3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Bag-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Bag-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BAG3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Bag-3 plasmide HDR (h) et le Bag-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BAG3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BAG3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.