BAF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401654

Descripción general

BANF1 codifica el factor de barrera frente a la autointegración (BAF), una proteína conservada de unión al ADN que conecta el ADN de doble hebra con proteínas de la envoltura nuclear que contienen dominio LEM y contribuye a la organización de la cromatina. BAF es esencial para el reensamblaje posmitótico de la envoltura nuclear, la regulación de la arquitectura de la cromatina de orden superior y el mantenimiento de la estabilidad del genoma durante el ciclo celular. A través de sus interacciones con las láminas, la emerina y otros componentes de la lámina nuclear, BAF influye en programas transcripcionales vinculados a la estructura nuclear y a la mecanotransducción. La desregulación de BANF1/BAF se ha asociado con envoltopatías nucleares y fenotipos progeroides, lo que lo hace relevante para el estudio de mecanismos de enfermedad relacionados con la integridad nuclear y la desregulación de la cromatina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BAF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BANF1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BANF1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BANF1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BAF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BANF1 para la investigación de la señalización de BAF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BANF1 críticos para la función de BAF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BANF1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BAF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BAF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BANF1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BAF (h) y el plásmido HDR BAF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BANF1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BANF1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.