Plasmide CRISPR/Cas9 KO BAF (h): sc-401654

Présentation

BANF1 code le facteur de barrière à l’auto-intégration (BAF), une protéine conservée de liaison à l’ADN qui établit un pont entre l’ADN double brin et les protéines de l’enveloppe nucléaire à domaine LEM, et contribue à l’organisation de la chromatine. BAF est indispensable à la réassemblage de l’enveloppe nucléaire après la mitose, à la régulation de l’architecture de la chromatine à grande échelle et au maintien de la stabilité du génome au cours du cycle cellulaire. Grâce à ses interactions avec les lamines, l’émérine et d’autres composants de la lamina nucléaire, BAF influence des programmes transcriptionnels liés à la structure nucléaire et à la mécanotransduction. La dérégulation de BANF1/BAF a été associée à des enveloppopathies nucléaires et à des phénotypes progéroïdes, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de mécanismes pathologiques liés à l’intégrité nucléaire et à une mauvaise régulation de la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BAF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BANF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BANF1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BANF1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BAF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BANF1 pour l'étude de la signalisation de BAF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BANF1 essentiels à la fonction de BAF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BANF1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BAF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BAF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BANF1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BAF plasmide HDR (h) et le BAF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BANF1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BANF1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.