Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
BACE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423847
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- BACE El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico BACE, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BACE Anticuerpo (61-3E7): sc-33711
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
BACE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423847 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Bace1 de ratón codifica la enzima 1 de escisión de la proteína precursora de amiloide en el sitio β (BACE), una proteasa aspártica que inicia el procesamiento amiloidogénico de APP para generar péptidos Aβ. La actividad de BACE1 se cruza con el tráfico endosomal y la proteólisis intramembrana regulada, influyendo en el recambio de proteínas neuronales y en la función sináptica. En el sistema nervioso, la expresión de Bace1 y la actividad de su proteasa se utilizan ampliamente como puntos de entrada moleculares para estudiar el procesamiento de APP, la fisiología axonal y la proteostasis. Las vías de escisión dependientes de BACE1 desreguladas están fuertemente vinculadas a la biología del amiloide y a mecanismos relevantes para la neurodegeneración en modelos experimentales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO BACE (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Bace1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Bace1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Bace1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BACE.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Bace1 para la investigación de la señalización de BACE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Bace1 críticos para la función de BACE
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Bace1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido BACE CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido BACE CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Bace1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BACE (m) y el plásmido HDR BACE (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Bace1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Bace1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.