BACE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h2): sc-401500-KO-2

概要

BACE1は、β部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素1（BACE）をコードしており、AβペプチドのN末端を生成することでAPPのアミロイド形成性（アミロイドジェニック）プロセシングを開始するアスパラギン酸プロテアーゼである。この活性はエンドソーム輸送およびリソソームのプロテオスタシスとも交差しており、酸性コンパートメントがBACEの成熟と基質切断を支えている。BACE1依存的なプロセシングは、APP由来フラグメントや他の神経基質のレベルを調節することで、シナプス機能や神経細胞シグナル伝達に影響を及ぼす。BACE1の発現または活性の異常は、アルツハイマー病に関連する分子病理と関連づけられており、アミロイド経路の生物学や神経変性の機序を扱う文脈でしばしば研究されている。

BACE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）は、human細胞株におけるBACE1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BACE1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BACE1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、BACEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、BACEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BACE1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• BACEの機能に不可欠なBACE1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BACE1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• BACE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびBACE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BACE1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  BACE HDRプラスミド（h）および BACE HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBACE1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBACE1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。