Plásmido Doble Nickase (m) B7-H4: sc-433877-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)B7-H4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa B7-H4 (m) y el plásmido de doble nickasa B7-H4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Vtcn1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: B7-H4 Anticuerpo (9): sc-66189
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) B7-H4 | sc-433877-NIC | 20 µg | $410.00 |
Vtcn1 codifica la proteína de punto de control inmunitario co-inhibidor B7-H4, un miembro de la familia B7 que limita la activación de los linfocitos T y modula las respuestas inflamatorias mediante la supresión de la proliferación y de la producción de citocinas. En tejidos de ratón, la expresión de B7-H4 en células presentadoras de antígeno y en compartimentos no hematopoyéticos contribuye a la tolerancia inmunitaria periférica y determina la comunicación cruzada mieloide–linfoide dentro del microambiente tisular. La señalización desregulada de B7-H4 se estudia con frecuencia en el contexto de la inmunología tumoral, donde un equilibrio alterado de puntos de control puede influir en la evasión inmunitaria y en la inmunidad antitumoral, así como en modelos de inflamación crónica y autoinmunidad. Por tanto, Vtcn1/B7-H4 es relevante para vías que gobiernan la regulación inmunitaria, la comunicación célula–célula y el control del microambiente sobre las respuestas inmunitarias adaptativas.
B7-H4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Vtcn1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Vtcn1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Vtcn1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Vtcn1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.