B7-H4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416865

Descripción general

VTCN1 codifica B7-H4 (inhibidor 1 de la activación de células T que contiene un dominio V-set), un ligando de punto de control inmunitario de la familia B7 que suprime la proliferación de las células T y la producción de citocinas, contribuyendo a la regulación inmunitaria periférica. B7-H4 se induce en contextos mieloides y epiteliales e influye en la presentación de antígenos, la señalización inflamatoria y los programas de evasión inmunitaria dentro del microambiente tumoral. Se ha descrito una expresión desregulada de VTCN1 en múltiples tumores sólidos y se asocia con una menor actividad inmunitaria antitumoral, además de intersectar con vías que gobiernan la polarización de macrófagos y los umbrales de activación de las células T. Estos atributos hacen de VTCN1 una diana útil para desentrañar redes de co-señalización inhibitoria y mecanismos inmunorreguladores relevantes para modelos de cáncer e inflamación crónica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO B7-H4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VTCN1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VTCN1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VTCN1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína B7-H4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VTCN1 para la investigación de la señalización de B7-H4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VTCN1 críticos para la función de B7-H4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VTCN1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido B7-H4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido B7-H4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VTCN1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR B7-H4 (h) y el plásmido HDR B7-H4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VTCN1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VTCN1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.