B230216G23Rik Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435631

Descripción general

Spx (B230216G23Rik) es un gen de ratón que sigue estando caracterizado de forma incompleta, aunque existen indicios de que participa en el control transcripcional y en programas de homeostasis celular que influyen en la adaptación al estrés y el estado metabólico. Como ocurre con otros loci poco anotados, su expresión y sus posibles interacciones proteicas suelen investigarse en el contexto de la señalización núcleo–citoplasma, el procesamiento de ARN y las redes de proteostasis, que pueden modular el comportamiento del ciclo celular y el potencial de diferenciación. La variación en este tipo de nodos reguladores se explora con frecuencia por sus posibles vínculos con fenotipos relevantes para el neurodesarrollo, la regulación inmunitaria y la susceptibilidad a rasgos complejos de enfermedad en organismos modelo. Por ello, el análisis funcional de Spx resulta útil para cartografiar redes génicas, identificar dependencias de vías y interpretar relaciones genotipo–fenotipo en sistemas derivados de ratón.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO B230216G23Rik (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Spx en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Spx junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Spx tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína B230216G23Rik.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Spx para la investigación de la señalización de B230216G23Rik, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Spx críticos para la función de B230216G23Rik
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Spx para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido B230216G23Rik CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido B230216G23Rik CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Spx. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR B230216G23Rik (m) y el plásmido HDR B230216G23Rik (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Spx para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Spx definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.