B230216G23Rik CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-435631

概要

Spx（B230216G23Rik）は、まだ十分に特徴づけられていないマウス遺伝子であり、転写制御や細胞恒常性プログラムに関与して、ストレス適応や代謝状態に影響を与える可能性が示唆されています。他の注釈情報が乏しい遺伝子座と同様に、その発現や推定されるタンパク質相互作用は、核―細胞質シグナル伝達、RNAプロセシング、プロテオスタシス（タンパク質恒常性）ネットワークといった文脈で検討されることが多く、これらは細胞周期の挙動や分化能を左右し得ます。このような制御ノードにおける変動は、モデル生物において神経発生、免疫制御、複雑疾患形質への感受性などに関連する表現型とのつながりが探索されることも少なくありません。したがって、Spxの機能解析は、遺伝子ネットワークのマッピング、経路依存性の同定、ならびにマウス由来系における遺伝子型から表現型への関係の解釈に有用です。

B230216G23Rik CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSpx遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Spx内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Spxのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、B230216G23Rikタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、B230216G23Rikシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Spx欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• B230216G23Rikの機能に不可欠なSpxエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Spxゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• B230216G23Rik CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびB230216G23Rik CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Spx遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  B230216G23Rik HDRプラスミド（m）および B230216G23Rik HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSpxホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSpx標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。