Particules Lentivirales d'Activation (h) Axl: sc-400393-LAC

L’AXL humain code Axl, une tyrosine kinase réceptrice de la famille TAM, principalement activée par GAS6, qui signale via les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK, NF-κB et STAT afin de réguler la survie cellulaire, la prolifération, la migration et la transition épithélio-mésenchymateuse. Axl module également la signalisation de l’immunité innée en favorisant l’efférocytose et en modulant le tonus inflammatoire, reliant les interactions tumeur–système immunitaire à l’homéostasie tissulaire. Une expression ou une activité d’AXL dérégulée est fréquemment associée à des phénotypes invasifs, à la compétence métastatique et à des états de tolérance aux traitements dans de multiples modèles de cancer, et a été impliquée dans le remodelage fibrotique ainsi que dans des contextes d’inflammation chronique. Par conséquent, AXL est largement étudié comme un nœud reliant le dialogue entre tyrosines kinases réceptrices, la dynamique d’adhérence et des programmes de signalisation induits par les cytokines.

Les particules d'activation lentivirales Axl (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de AXL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Axl (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription AXL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Axl. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif AXL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.