ATP5S Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406318

Descripción general

ATP5S codifica un pequeño componente accesorio del complejo mitocondrial F1F0 ATP sintasa (Complejo V), que cataliza la producción de ATP utilizando la fuerza protón‑motriz generada por la fosforilación oxidativa. El funcionamiento adecuado de ATP5S sostiene la bioenergética mitocondrial, el mantenimiento del potencial de membrana y la coordinación del metabolismo energético celular con procesos como la apoptosis y la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno. Las alteraciones en el ensamblaje de la ATP sintasa o en la actividad del Complejo V se asocian con disfunción mitocondrial, un rasgo característico observado en diversas condiciones, incluidos fenotipos neuromusculares y neurodegenerativos, así como la remodelación metabólica tumoral. En consecuencia, ATP5S es relevante para estudios de la respiración mitocondrial, las respuestas al estrés energético y las vías de señalización mitocondrial que influyen en las decisiones sobre el destino celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP5S (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATP5S en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATP5S junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATP5S tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP5S.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATP5S para la investigación de la señalización de ATP5S, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATP5S críticos para la función de ATP5S
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATP5S para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATP5S CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ATP5S CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATP5S. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP5S (h) y el plásmido HDR ATP5S (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATP5S para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATP5S definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.