Plásmido CRISPR de Activación (m) ATP5J: sc-419251-ACT

Atp5j codifica ATP5J (también conocida como F6), una pequeña subunidad accesoria de la ATP sintasa mitocondrial F1Fo (Complejo V) que favorece el ensamblaje y el acoplamiento eficiente del flujo de protones con la producción de ATP durante la fosforilación oxidativa. Al modular la bioenergética mitocondrial, ATP5J contribuye al mantenimiento del equilibrio celular ATP/ADP, del potencial de membrana mitocondrial y de la flexibilidad metabólica ante cambios en las demandas energéticas. Las alteraciones en la función de la ATP sintasa y en la actividad subsiguiente de la cadena respiratoria se asocian con fenotipos de disfunción mitocondrial que afectan a tejidos de alta demanda energética y se relacionan con el estrés oxidativo y procesos vinculados a la apoptosis. En modelos murinos, la modificación de la producción mitocondrial de ATP se utiliza con frecuencia para estudiar mecanismos relevantes para la biología de enfermedades neuromusculares, cardíacas y metabólicas a nivel de las vías mitocondriales.

ATP5J El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Atp5j sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATP5J El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Atp5j en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Atp5j, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATP5J. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Atp5j y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATP5J en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATP5J en células tumorales con expresión de Atp5j silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.