Plasmide CRISPR d'Activation (m) ATP5J: sc-419251-ACT

Atp5j code pour ATP5J (également appelé F6), une petite sous-unité accessoire de l’ATP synthase mitochondriale F1Fo (complexe V) qui favorise l’assemblage et le couplage efficace du flux de protons à la production d’ATP lors de la phosphorylation oxydative. En modulant la bioénergétique mitochondriale, ATP5J contribue au maintien de l’équilibre ATP/ADP cellulaire, du potentiel de membrane mitochondrial et de la flexibilité métabolique face à des besoins énergétiques changeants. Des altérations de la fonction de l’ATP synthase et, en aval, de l’activité de la chaîne respiratoire sont associées à des phénotypes de dysfonction mitochondriale qui affectent les tissus à forte demande énergétique et s’articulent avec des processus liés au stress oxydatif et à l’apoptose. Dans des modèles murins, la modification de la production d’ATP mitochondriale est fréquemment exploitée pour étudier des mécanismes pertinents pour la biologie des maladies neuromusculaires, cardiaques et métaboliques au niveau des voies mitochondriales.

ATP5J Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Atp5j sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATP5J Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Atp5j dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Atp5j, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATP5J. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Atp5j natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATP5J au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATP5J dans les cellules tumorales présentant une expression de Atp5j silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.