Plásmido CRISPR de Activación (h) ATP5H: sc-403948-ACT

ATP5H codifica una pequeña subunidad estructural de la ATP sintasa mitocondrial (Complejo V) que favorece el ensamblaje y la estabilidad del sector F0, necesario para la producción de ATP acoplada al gradiente de protones. Al contribuir a la fosforilación oxidativa, ATP5H influye en la homeostasis energética celular, el potencial de membrana mitocondrial y el equilibrio redox, con efectos posteriores sobre la señalización dependiente del metabolismo y las respuestas al estrés. La expresión o función alteradas de subunidades de la ATP sintasa se asocian con frecuencia a fenotipos de disfunción mitocondrial, incluidos bioenergética deteriorada y una mayor sensibilidad al estrés oxidativo, rasgos recurrentes en trastornos neuromusculares y metabólicos. Como nodo de la bioenergética mitocondrial, ATP5H es relevante para estudios sobre la regulación de la cadena respiratoria, el control de calidad mitocondrial y la reprogramación metabólica en estados celulares relevantes para la enfermedad.

ATP5H El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP5H sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATP5H El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP5H en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP5H, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATP5H. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP5H y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATP5H en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATP5H en células tumorales con expresión de ATP5H silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.