Plásmido Doble Nickase (h) ATP5G1: sc-416816-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ATP5G1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATP5G1 (h) y el plásmido de doble nickasa ATP5G1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP5G1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATP5G1 Anticuerpo (1A12): sc-293324
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ATP5G1 | sc-416816-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ATP5G1 | sc-416816-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP5G1 codifica una subunidad localizada en la mitocondria del sector F0 de la ATP sintasa (complejo V), que contribuye a la translocación de protones y a la producción eficiente de ATP mediante fosforilación oxidativa. Al favorecer el acoplamiento de la cadena de transporte de electrones con la síntesis de ATP, ATP5G1 influye en el potencial de membrana mitocondrial, la homeostasis energética celular y procesos posteriores como la gestión de especies reactivas de oxígeno y la susceptibilidad a la apoptosis. La alteración de la función de la ATP sintasa y de las vías más amplias de OXPHOS se ha implicado en fenotipos de disfunción mitocondrial relevantes para la neurodegeneración, el estrés cardiometabólico y la remodelación bioenergética de células cancerosas. Como componente central de la conversión energética mitocondrial, ATP5G1 se estudia con frecuencia en contextos de reprogramación metabólica, adaptación a la hipoxia y control de calidad mitocondrial.
ATP5G1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP5G1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP5G1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP5G1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP5G1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.