Plásmido CRISPR de Activación (h) ATP5B: sc-401009-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) ATP5B es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) ATP5B incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR ATP5B (h) y el plásmido de activación CRISPR ATP5B (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de ATP5B. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATP5B Anticuerpo (E-1): sc-55597
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) ATP5B | sc-401009-ACT | 20 µg | $397.00 |
ATP5B codifica la subunidad beta de la ATP sintasa mitocondrial (Complejo V), un componente catalítico central del sector F1 que acopla la fuerza protón‑motriz a la producción de ATP durante la fosforilación oxidativa. Al sostener la bioenergética celular y el mantenimiento del potencial de membrana mitocondrial, ATP5B influye en procesos como la homeostasis de las especies reactivas de oxígeno, la susceptibilidad a la apoptosis y la adaptación metabólica. La expresión o función alteradas de subunidades de la ATP sintasa, incluida ATP5B, se han asociado con fenotipos de disfunción mitocondrial observados en la neurodegeneración, el estrés cardiometabólico y la reprogramación metabólica relacionada con el cáncer, por lo que es una lectura frecuente en estudios de biología mitocondrial. Por ello, ATP5B se analiza con frecuencia en vías que vinculan la actividad de la cadena de transporte de electrones con la demanda de ATP, el control de calidad mitocondrial y la señalización de respuesta al estrés.
ATP5B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP5B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
ATP5B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP5B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP5B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATP5B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP5B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATP5B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATP5B en células tumorales con expresión de ATP5B silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.