ATP-citrate synthase Plasmide Double Nickase (h): sc-403146-NIC

L’ACLY umano codifica l’ATP-citrato sintasi, un enzima citosolico che converte citrato e CoA in acetil-CoA e ossalacetato, collegando il flusso di carbonio mitocondriale alla biosintesi dei lipidi e all’acetilazione proteica. Fornendo acetil-CoA per la sintesi de novo di acidi grassi e colesterolo e per l’acetilazione degli istoni, ACLY integra lo stato nutrizionale con la regolazione metabolica ed epigenetica. L’attività di ACLY interagisce con la glicolisi, il ciclo dell’acido citrico (TCA) e le reti regolatorie degli steroli, influenzando la biogenesi di membrana e l’equilibrio redox. Un’espressione o un flusso di ACLY deregolati sono stati associati a stati metabolici alterati osservati nella biologia dei tumori, nella resistenza all’insulina e nella segnalazione infiammatoria, rendendolo un bersaglio utile per lo studio di fenotipi dipendenti dal metabolismo.

ATP-citrate synthase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACLY nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACLY. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACLY. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACLY interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.