Plasmide Double Nickase (h) ATP-citrate synthase: sc-403146-NIC

Le gène humain **ACLY** code l’ATP-citrate synthase, une enzyme cytosolique qui convertit le citrate et la CoA en acétyl-CoA et oxaloacétate, reliant le flux de carbone mitochondrial à la biosynthèse des lipides et à l’acétylation des protéines. En fournissant de l’acétyl-CoA à la synthèse de novo des acides gras et du cholestérol, ainsi qu’à l’acétylation des histones, ACLY intègre l’état nutritionnel à la régulation métabolique et épigénétique. L’activité d’ACLY s’articule avec la glycolyse, le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) et les réseaux de régulation des stérols, influençant la biogenèse membranaire et l’équilibre rédox. Une expression ou un flux d’ACLY dérégulés ont été associés à des états métaboliques altérés observés en cancérologie, dans la résistance à l’insuline et la signalisation inflammatoire, ce qui en fait une cible utile pour étudier des phénotypes dépendants du métabolisme.

ATP-citrate synthase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACLY dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACLY. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACLY. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACLY.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.