Plásmido CRISPR de Activación (h) ATP-citrate synthase: sc-403146-ACT

ACLY codifica la ATP-citrato sintasa, una enzima citosólica que convierte el citrato y la CoA en acetil-CoA y oxaloacetato, enlazando así el flujo de carbono mitocondrial con la biosíntesis de lípidos y colesterol. Al aportar acetil-CoA para la síntesis de ácidos grasos y la acetilación de proteínas, ACLY influye en la reprogramación metabólica, el equilibrio redox y la regulación epigenética de la expresión génica. Este nodo integra señales de la glucólisis, el ciclo del ácido cítrico (TCA) y las vías de detección de nutrientes para modular programas de proliferación y diferenciación. La actividad desregulada de ACLY se ha asociado con cambios en la lipogénesis y en los patrones de acetilación observados en contextos de investigación sobre enfermedades metabólicas y oncología.

ATP-citrate synthase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACLY sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATP-citrate synthase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACLY en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACLY, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATP-citrate synthase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACLY y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATP-citrate synthase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATP-citrate synthase en células tumorales con expresión de ACLY silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.