Plásmido Doble Nickase (m) ATGL: sc-426224-NIC

Pnpla2 en ratón codifica la lipasa de triglicéridos del tejido adiposo (ATGL), una enzima limitante de la velocidad que inicia la hidrólisis de triacilglicéridos en las gotas lipídicas para liberar ácidos grasos y diacilglicerol. La actividad de ATGL coordina el equilibrio energético celular al aportar sustratos para la β-oxidación mitocondrial y modular el recambio de las gotas lipídicas, a menudo actuando en conjunto con cofactores como ABHD5/CGI-58. Gracias a su papel central en el catabolismo de lípidos neutros, ATGL influye en la señalización metabólica y la homeostasis lipídica en el tejido adiposo, el hígado, el corazón y el músculo esquelético. La desregulación de Pnpla2/ATGL se asocia con acumulación patológica de lípidos y alteraciones del metabolismo energético, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudiar trastornos de almacenamiento lipídico y respuestas al estrés metabólico in vivo y en células de ratón cultivadas.

ATGL El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pnpla2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pnpla2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pnpla2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pnpla2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.