ATGL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426224

Descripción general

Pnpla2 en ratón codifica la lipasa de triglicéridos del tejido adiposo (ATGL), una enzima clave y limitante de la velocidad que inicia la hidrólisis citosólica de triglicéridos para generar diacilglicerol y ácidos grasos libres destinados a la β-oxidación mitocondrial y a la señalización lipídica. La actividad de ATGL coordina la lipólisis con la homeostasis energética y se vincula con el recambio de las gotas lipídicas, los programas transcripcionales mediados por PPAR y las vías metabólicas sensibles a la insulina. La alteración de la lipólisis dependiente de ATGL modifica el almacenamiento lipídico celular y el flujo de ácidos grasos, lo que relaciona a Pnpla2 con la desregulación del metabolismo lipídico y con respuestas al estrés en tejidos metabólicamente activos. Estas características hacen de ATGL una diana ampliamente utilizada en estudios mecanísticos de biología de gotas lipídicas, detección de nutrientes y remodelación metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATGL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pnpla2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pnpla2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pnpla2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATGL.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pnpla2 para la investigación de la señalización de ATGL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pnpla2 críticos para la función de ATGL
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pnpla2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATGL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ATGL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pnpla2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATGL (m) y el plásmido HDR ATGL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pnpla2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pnpla2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.