Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) ATG7: sc-428805-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ATG7 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATG7 (m) y el plásmido de doble nickasa ATG7 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Atg7. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATG7 Anticuerpo (B-9): sc-376212
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ATG7 | sc-428805-NIC | 20 µg | $410.00 |
Atg7 de ratón codifica ATG7, una enzima tipo E1 que activa ATG12 y proteínas de la familia LC3/ATG8 para impulsar reacciones de conjugación similares a las de la ubiquitina, necesarias para la formación de autofagosomas. ATG7 cumple una función central en la macroautofagia, coordinando el secuestro de carga y el recambio lisosomal para mantener la proteostasis y el control de calidad de los orgánulos, incluida la mitofagia. A través de su papel en la detección de nutrientes y la adaptación al estrés celular, ATG7 influye en la señalización inmunitaria, el metabolismo y la neurobiología, y su desregulación se estudia con frecuencia en contextos como la neurodegeneración, los fenotipos inflamatorios y las respuestas al estrés relacionadas con el cáncer. Por ello, el flujo autofágico dependiente de Atg7 se utiliza ampliamente como lectura para desentrañar vías que conectan la degradación intracelular con la homeostasis tisular.
ATG7 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Atg7 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Atg7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Atg7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Atg7 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.