Plásmido Doble Nickase (h) Atg2A: sc-411671-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Atg2A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Atg2A (h) y el plásmido de doble nickasa Atg2A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATG2A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Atg2A Anticuerpo (G-1): sc-514207
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Atg2A | sc-411671-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Atg2A | sc-411671-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG2A codifica Atg2A, un factor de autofagia conservado necesario para la biogénesis y expansión del autofagosoma, que favorece la transferencia de lípidos en las membranas del fagóforo y se coordina con la maquinaria central de ATG. En células humanas, Atg2A contribuye al flujo autofágico, a la adaptación al estrés por nutrientes y a la proteostasis al promover la formación de autofagosomas funcionales que entregan carga citoplasmática a los lisosomas. La alteración de vías dependientes de ATG2A puede modificar la homeostasis de orgánulos, el control de calidad mitocondrial y la señalización inflamatoria, vinculando defectos de la autofagia con mecanismos relevantes para la neurodegeneración, la tolerancia al estrés en células cancerosas y la disfunción metabólica. Por lo tanto, ATG2A es una diana útil para analizar programas de autofagia selectiva y masiva, y sus fenotipos celulares aguas abajo.
Atg2A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATG2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATG2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATG2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATG2A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.