Plásmido CRISPR de Activación (m) ATF4: sc-419228-ACT

El gen Atf4 de ratón codifica el factor de transcripción activador 4 (ATF4), un factor de transcripción bZIP sensible al estrés que integra señales de la respuesta integrada al estrés y de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR) para remodelar programas de expresión génica. ATF4 se induce aguas abajo de la fosforilación de eIF2α y coordina el metabolismo de aminoácidos, la homeostasis redox y del glutatión, la autofagia y vías adaptativas de supervivencia durante la limitación de nutrientes, el estrés del retículo endoplásmico y la hipoxia. Mediante la interacción cruzada con las vías de señalización PERK–eIF2α, mTOR y el estrés oxidativo, ATF4 influye en la diferenciación celular y la función mitocondrial en múltiples tejidos. La actividad desregulada de ATF4 se ha asociado con una adaptación patológica al estrés y con fenotipos inflamatorios y metabólicos, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de proteostasis y modelos murinos de enfermedades vinculadas al estrés.

ATF4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Atf4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ATF4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Atf4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Atf4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ATF4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Atf4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ATF4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ATF4 en células tumorales con expresión de Atf4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.