ATF-6α Double Nickase Plasmid (m): sc-432646-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATF-6α Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATF-6α Double-Nickase-Plasmid (m) und ATF-6α Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Atf6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ATF-6α: sc-166659
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATF-6α Double Nickase Plasmid (m) | sc-432646-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF-6α Double Nickase Plasmid (m2) | sc-432646-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der aktivierende Transkriptionsfaktor 6 (Atf6) kodiert ATF-6α, einen im ER lokalisierten transmembranen bZIP-Transkriptionsfaktor, der als zentraler Sensor für die Anhäufung ungefalteter Proteine dient. Bei ER-Stress wird ATF-6α zum Golgi-Apparat transportiert und dort durch regulierte intramembranäre Proteolyse verarbeitet; dabei wird ein nukleäres Fragment freigesetzt, das Transkriptionsprogramme zur Kontrolle der Proteostase induziert, darunter ER-Chaperone, Komponenten des ER-assoziierten Abbaus (ERAD) sowie Gene des Lipidstoffwechsels. ATF-6α wirkt im Rahmen der Unfolded-Protein-Response (UPR) zusammen mit der IRE1/XBP1- und der PERK/eIF2α-Signalgebung, um die ER-Homöostase wiederherzustellen und adaptive Umbauprozesse zu koordinieren. Eine Fehlregulation der ATF6-Aktivität wurde mit pathobiologischen Prozessen bei chronischem ER-Stress in Verbindung gebracht, darunter Stoffwechselstörungen, neurodegenerative Prozesse und kardiovaskuläre Phänotypen, wodurch Atf6 ein häufig genutzter Knotenpunkt für mechanistische Studien der Stresssignalgebung ist.
ATF-6α Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Atf6-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Atf6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Atf6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Atf6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.