ATF-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430721

Descripción general

El factor activador de la transcripción 5 (ATF-5), codificado por el gen Atf5 del ratón, es un factor de transcripción de cremallera de leucina básica (bZIP) que regula programas de expresión génica que controlan la adaptación al estrés celular, la diferenciación y la supervivencia. ATF-5 participa en la señalización de la respuesta integrada al estrés y puede acoplar señales upstream asociadas a eIF2α/ATF4 con salidas transcripcionales que influyen en la función mitocondrial y la proteostasis. En el sistema nervioso y en otros tejidos en desarrollo, ATF-5 se ha vinculado a decisiones de linaje y al mantenimiento de estados proliferativos o similares a progenitores mediante un control transcripcional dependiente del contexto. La actividad desregulada de ATF-5 se ha asociado con una tolerancia anómala al estrés y con vías de supervivencia celular alteradas, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos sobre la remodelación, relacionada con enfermedades, de redes transcripcionales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Atf5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Atf5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Atf5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATF-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Atf5 para la investigación de la señalización de ATF-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Atf5 críticos para la función de ATF-5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Atf5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATF-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ATF-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Atf5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATF-5 (m) y el plásmido HDR ATF-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Atf5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Atf5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.