ATE1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405539

Descripción general

ATE1 codifica la arginiltransferasa 1, una enzima clave de la vía de la regla del N‑extremo (N‑end rule) que, de manera postraduccional, añade arginina a los extremos N de las proteínas, creando degrones que dirigen los sustratos a la degradación proteasomal dependiente de ubiquitina. Al regular la estabilidad proteica, ATE1 influye en la proteostasis, la organización del citoesqueleto y la señalización sensible al estrés, y se ha relacionado con el control de la migración y la adhesión celular mediante la modulación de proteínas asociadas a la actina. La arginilación dependiente de ATE1 también contribuye a la adaptación mitocondrial y al estrés oxidativo al determinar la abundancia de determinados reguladores. La desregulación de componentes de la regla del N‑extremo, incluido ATE1, se asocia con alteraciones de la homeostasis celular relevantes para la biología del cáncer, la neurodegeneración y fenotipos del desarrollo en sistemas experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATE1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATE1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATE1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATE1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATE1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATE1 para la investigación de la señalización de ATE1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATE1 críticos para la función de ATE1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATE1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATE1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ATE1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATE1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATE1 (h) y el plásmido HDR ATE1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATE1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATE1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.