Plasmide Double Nickase (h) ATAD5: sc-405654-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATAD5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATAD5 Double Nickase (h) et le plasmide ATAD5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATAD5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATAD5 | sc-405654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATAD5 | sc-405654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATAD5 (protéine 5 de la famille des ATPases contenant un domaine AAA) est un régulateur clé de la stabilité du génome. Elle intervient dans la réparation post-réplicative en facilitant le déchargement de PCNA de la chromatine, et coordonne la progression des fourches de réplication ainsi que leur reprise après des dommages à l’ADN. Elle agit à l’interface entre la réplication de l’ADN et les voies de tolérance aux lésions de l’ADN, notamment le changement de matrice (template switching) et la synthèse translésionnelle, limitant ainsi la mutagenèse associée à la réplication. Par son rôle dans le maintien de la fidélité de la réplication et la prévention de l’instabilité chromosomique, ATAD5 est liée à des mécanismes pertinents pour la tumorigenèse et d’autres affections dues à des défauts de réparation de l’ADN et au stress réplicatif.
ATAD5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATAD5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATAD5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATAD5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATAD5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.