ATAD1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-413720

Descripción general

ATAD1 (ATPase de la familia AAA con dominio 1) es una ATPasa AAA+ de la membrana externa mitocondrial que participa en el control de calidad proteica extrayendo y eliminando de la membrana proteínas ancladas por cola que están mal localizadas o dañadas. Mediante su actividad dislocasa dependiente de ATP, ATAD1 contribuye a la homeostasis mitocondrial, se coordina con las vías de ubiquitina–proteasoma e influye en las respuestas al estrés del orgánulo que afectan al metabolismo y la supervivencia celular. La alteración de la vigilancia de proteínas de membrana dependiente de ATAD1 puede modificar la dinámica mitocondrial y la proteostasis, procesos que se estudian con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración, la desregulación metabólica y la remodelación mitocondrial asociada al cáncer. Como regulador del recambio de proteínas mitocondriales, ATAD1 constituye un nodo útil para investigar cómo el control de calidad del orgánulo se entrecruza con la señalización de apoptosis y la adaptación celular al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATAD1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ATAD1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ATAD1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ATAD1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATAD1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ATAD1 para la investigación de la señalización de ATAD1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ATAD1 críticos para la función de ATAD1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ATAD1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ATAD1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ATAD1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ATAD1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATAD1 (h) y el plásmido HDR ATAD1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ATAD1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ATAD1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.