Plásmido CRISPR de Activación (h) AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2: sc-418156-ACT

AGTR2 codifica el receptor de angiotensina II tipo 2 (AT2), un GPCR de siete dominios transmembrana del sistema renina–angiotensina que contrarresta la señalización mediada por AT1. Tras la unión de angiotensina II, AT2 modula vías acopladas a proteínas G y asociadas a β-arrestina, y con frecuencia se vincula con la señalización de óxido nítrico/cGMP, la activación de fosfatasas y la regulación de la actividad de MAPK, moldeando programas celulares que influyen en la diferenciación, el crecimiento de neuritas, la inflamación y la remodelación tisular. La expresión y la señalización de AGTR2 se estudian en biología vascular y en contextos del desarrollo, y se analizan con frecuencia en modelos de remodelación asociada a hipertensión, respuestas a lesión cardiovascular, mecanismos de enfermedad renal y crosstalk de señalización en células cancerosas. Dado que la salida del receptor depende en gran medida del contexto, la perturbación controlada de los niveles endógenos de AGTR2 es útil para diseccionar el sesgo de vía y la dinámica receptor–ligando en tipos celulares relevantes.

AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AGTR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AGTR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AGTR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AGTR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 en células tumorales con expresión de AGTR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.