Plasmide CRISPR d'Activation (h) AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2: sc-418156-ACT

AGTR2 code le récepteur de l’angiotensine II de type 2 (AT2), un RCPG à sept domaines transmembranaires du système rénine–angiotensine, qui contrebalance la signalisation portée par AT1. Après liaison de l’angiotensine II, AT2 module des voies couplées aux protéines G et des voies dépendantes de la β-arrestine, et il est fréquemment associé à la signalisation NO/cGMP, à l’activation de phosphatases et à la régulation de l’activité des MAPK, façonnant des programmes cellulaires qui influencent la différenciation, la croissance des neurites, l’inflammation et le remodelage tissulaire. L’expression et la signalisation d’AGTR2 sont étudiées en biologie vasculaire et dans des contextes développementaux, et sont souvent explorées dans des modèles de remodelage associé à l’hypertension, de réponses cardiovasculaires aux lésions, de mécanismes des maladies rénales et de crosstalk de signalisation dans les cellules cancéreuses. Comme la sortie du récepteur dépend fortement du contexte, la perturbation contrôlée des niveaux endogènes d’AGTR2 est utile pour disséquer le biais de voie et la dynamique récepteur–ligand dans des types cellulaires pertinents.

AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AGTR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AGTR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AGTR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AGTR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AT2/Angiotensin Receptor 2/AGTR2 dans les cellules tumorales présentant une expression de AGTR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.