Partículas Lentivirales de Activación (h) Asparagine synthetase: sc-402240-LAC

ASNS codifica la asparagina sintetasa humana, una enzima citosólica que cataliza la conversión dependiente de ATP de aspartato y glutamina en asparagina y glutamato, conectando el metabolismo del nitrógeno con la homeostasis de los aminoácidos. Al regular la disponibilidad intracelular de asparagina, ASNS influye en la síntesis de proteínas, el equilibrio redox y las respuestas adaptativas a la limitación de nutrientes, con vínculos con la respuesta integrada al estrés y con vías de detección de aminoácidos. La expresión de ASNS se modula con frecuencia bajo estrés metabólico y puede determinar la dependencia celular de aminoácidos extracelulares, lo que la hace relevante para estudios de reprogramación metabólica y tolerancia al estrés. Las alteraciones en la actividad y la regulación de ASNS se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con la biología tumoral en contextos en los que la disponibilidad de nutrientes limita el crecimiento.

Las partículas de activación lentiviral Asparagine synthetase (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ASNS en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Asparagine synthetase (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ASNS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Asparagine synthetase. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ASNS y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.