Plásmido Doble Nickase (m) Asparagine synthetase: sc-424181-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Asparagine synthetase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Asparagine synthetase (m) y el plásmido de doble nickasa Asparagine synthetase (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Asns. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Asparagine synthetase Anticuerpo (G-10): sc-365809
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Asparagine synthetase | sc-424181-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Asparagine synthetase | sc-424181-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Asns de ratón codifica la asparagina sintetasa, una enzima citosólica que cataliza la conversión dependiente de ATP de aspartato y glutamina en asparagina y glutamato, manteniendo los reservorios intracelulares de asparagina y la homeostasis del nitrógeno. La actividad de ASNS respalda la biosíntesis de aminoácidos y se integra con programas de detección de nutrientes, incluida la respuesta integrada al estrés y la transcripción regulada por ATF4 durante la limitación de aminoácidos. La alteración de la disponibilidad de asparagina influye en la traducción de proteínas, el equilibrio redox y la reprogramación metabólica, lo que vincula a ASNS con la adaptación celular bajo estrés nutricional. En investigación biomédica, Asns se examina con frecuencia en contextos de vulnerabilidad metabólica, señalización de estrés y fenotipos de dependencia de aminoácidos relevantes para el metabolismo de células cancerosas y los trastornos del neurodesarrollo.
Asparagine synthetase El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Asns en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Asns. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Asns. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Asns alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.