Plásmido Doble Nickase (h) Asparagine synthetase: sc-402240-NIC

ASNS codifica la asparagina sintetasa humana, una amidotransferasa citosólica que cataliza la conversión dependiente de ATP de aspartato y glutamina en asparagina y glutamato. Esta actividad vincula la homeostasis de aminoácidos con el metabolismo del nitrógeno y sostiene las demandas biosintéticas durante el estrés por falta de nutrientes mediante su integración con la respuesta a aminoácidos y el control translacional regulado por mTOR. La expresión de ASNS se regula dinámicamente por vías celulares de estrés como la señalización de ATF4, lo que influye en la adaptación a la limitación de glutamina y al estrés del retículo endoplásmico. La actividad y la expresión desreguladas de ASNS se han asociado con estados metabólicos alterados observados en la dependencia de nutrientes de células cancerosas y con trastornos del neurodesarrollo que implican una biosíntesis de asparagina deficiente.

Asparagine synthetase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ASNS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ASNS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ASNS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ASNS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.