Plásmido CRISPR de Activación (h) Asparagine synthetase: sc-402240-ACT

El gen humano **ASNS** codifica la asparagina sintetasa, una enzima citosólica que cataliza la conversión dependiente de ATP de aspartato y glutamina en asparagina y glutamato, conectando la homeostasis de aminoácidos con el metabolismo del nitrógeno. La expresión de **ASNS** está regulada por señales de nutrientes y de estrés, incluidas la respuesta integrada al estrés y las vías de respuesta a aminoácidos, y puede influir en la capacidad de síntesis proteica durante limitaciones metabólicas. La actividad alterada de **ASNS** se ha asociado con la adaptación celular a la privación de nutrientes y con cambios en la aptitud proliferativa. Las variantes heredadas con pérdida de función en **ASNS** se relacionan con la deficiencia de ASNS, un trastorno del neurodesarrollo caracterizado por un desarrollo cerebral alterado, lo que subraya la importancia del gen para el equilibrio de aminoácidos en el organismo.

Asparagine synthetase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ASNS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Asparagine synthetase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ASNS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ASNS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Asparagine synthetase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ASNS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Asparagine synthetase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Asparagine synthetase en células tumorales con expresión de ASNS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.