Partículas Lentivirales de Activación (m) ASM: sc-423033-LAC

Smpd1 codifica la esfingomielinasa ácida (ASM), una hidrolasa lisosomal que escinde la esfingomielina en ceramida y fosfocolina, regulando así el recambio de esfingolípidos y la composición de la membrana. A través del control de la generación de ceramida, la ASM influye en el tráfico endolisosomal, la dinámica de los microdominios de membrana y las vías de señalización sensibles al estrés que convergen con programas de autofagia, apoptosis e inflamación. La alteración de la actividad de Smpd1 perturba la función lisosomal y la homeostasis lipídica, modificando la señalización de células inmunitarias y la viabilidad neuronal en sistemas modelo. En el ratón, Smpd1 se utiliza ampliamente para estudiar el metabolismo de los esfingolípidos y los mecanismos que vinculan la disfunción lisosomal con la neurodegeneración y fenotipos metabólicos.

Las partículas de activación lentiviral ASM (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Smpd1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ASM (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Smpd1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ASM. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Smpd1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.