Plásmido CRISPR de Activación (h) ASIC3: sc-405106-ACT

El ASIC3 humano (subunidad 3 del canal iónico sensible a ácido) es un canal catiónico activado por protones y sensible a la amilorida de la familia DEG/ENaC que se abre en respuesta a la acidificación extracelular, permitiendo la entrada de Na⁺ y la despolarización de la membrana. Es altamente relevante para la excitabilidad de las neuronas sensoriales y transduce cambios en el pH tisular asociados con inflamación, isquemia y estrés mecánico, integrándose con procesos más amplios de homeostasis iónica y señalización excitatoria. La actividad de ASIC3 influye indirectamente en la señalización downstream dependiente de calcio a través de vías impulsadas por la despolarización y contribuye a circuitos nociceptivos y mecanosensoriales. En entornos de investigación, la expresión o función desregulada de ASIC3 se ha vinculado con hipersensibilidad al dolor, respuestas inflamatorias y con la fisiología neuromuscular o musculoesquelética en microambientes ácidos.

ASIC3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ASIC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASIC3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ASIC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ASIC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASIC3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ASIC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASIC3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASIC3 en células tumorales con expresión de ASIC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.