Plásmido Doble Nickase (h) ASIC1: sc-401452-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ASIC1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ASIC1 (h) y el plásmido de doble nickasa ASIC1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ASIC1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ASIC1 | sc-401452-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ASIC1 | sc-401452-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano ASIC1 (canal iónico 1 sensible a ácido, ASIC1) codifica un canal iónico activado por protones y permeable al sodio de la familia DEG/ENaC, que acopla la acidificación extracelular a una rápida despolarización de la membrana. La actividad de ASIC1 modula la excitabilidad neuronal y la señalización sináptica, y puede influir en la dinámica del calcio intracelular mediante la activación secundaria de canales dependientes de voltaje y la señalización posterior de quinasas. El canal participa en procesos de detección de pH vinculados a la acidosis asociada a isquemia, la transmisión nociceptiva y microambientes neuroinflamatorios. La desregulación de la función o de la expresión de ASIC1 se ha investigado en contextos que incluyen la susceptibilidad al ictus, estados de dolor crónico y conductas relacionadas con la ansiedad, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en neurobiología y en investigación de canales iónicos.
ASIC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ASIC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ASIC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ASIC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ASIC1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.