Plásmido Doble Nickase (h) ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1: sc-400429-NIC

ASGR1 codifica la subunidad principal del receptor hepático de asialoglucoproteínas (ASGPR1), una lectina tipo C expresada predominantemente en la superficie de los hepatocitos que reconoce glucoproteínas desialiladas con galactosa terminal o N-acetilgalactosamina. Tras la unión del ligando, ASGPR1 media la endocitosis dependiente de clatrina y el tráfico hacia compartimentos endolisosomales, contribuyendo a la depuración de glucoproteínas y a la regulación homeostática de proteínas circulantes. Este receptor participa en procesos de reconocimiento de carbohidratos y de transporte vesicular que se entrecruzan con vías metabólicas específicas del hígado y con la dinámica de reciclaje del receptor. Las alteraciones en la función o expresión de ASGR1 se investigan con frecuencia en contextos de disfunción hepática y metabolismo lipídico, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos en biología hepática.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ASGR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ASGR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ASGR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ASGR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.