Plásmido CRISPR de Activación (m) ASCL3: sc-425304-ACT

El factor de transcripción 3 de la familia achaete-scute bHLH (ASCL3) es un regulador básico hélice–bucle–hélice en ratón implicado en la especificación de linajes y en programas de diferenciación, particularmente en contextos de células epiteliales y secretoras. Al unirse a motivos E-box y coordinar redes transcripcionales con otros factores bHLH, ASCL3 puede influir en decisiones de destino celular, maduración y mantenimiento de fenotipos celulares especializados. La expresión desregulada de reguladores del desarrollo bHLH se asocia con frecuencia a estados de diferenciación alterados, proliferación aberrante y reprogramación transcripcional relevante para procesos oncogénicos y metaplásicos. Por lo tanto, Ascl3 sirve como un nodo útil para diseccionar vías de desarrollo impulsadas por factores de transcripción y cambios en la expresión génica vinculados a la diferenciación en sistemas de modelos murinos.

ASCL3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ascl3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASCL3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ascl3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ascl3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASCL3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ascl3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASCL3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASCL3 en células tumorales con expresión de Ascl3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.