Plasmide Double Nickase (m) ASCL1: sc-421562-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ASCL1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASCL1 Double Nickase (m) et le plasmide ASCL1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ascl1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASCL1 Antibody (G-7): sc-390794
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ASCL1 | sc-421562-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ASCL1 | sc-421562-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur de transcription bHLH 1 de la famille achaete-scute (ASCL1 ; Ascl1) est un régulateur proneural qui pilote l’engagement dans la lignée neuronale et la différenciation au cours du développement du système nerveux chez la souris. En se liant aux motifs E-box, ASCL1 coordonne des programmes transcriptionnels qui couplent la sortie du cycle cellulaire à la neurogenèse, en interagissant avec la signalisation Notch, le remodelage de la chromatine et des réseaux régulateurs bHLH qui orientent les décisions de destinée des progéniteurs neuraux. Une activité altérée d’ASCL1 est utilisée pour modéliser des états de différenciation dérégulés pertinents pour la neurobiologie du développement, ainsi que des programmes transcriptionnels de type neuroendocrinien dépendants du contexte, observés lors de transitions d’état cellulaire associées à des maladies.
ASCL1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ascl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ascl1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ascl1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ascl1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.